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延邊PCR實驗室設計

2024-02-19 16:56:10
延邊PCR實驗室設計
詳細介紹:

一、臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設置原則

(一) 臨床基因擴增檢驗實驗室原則上分為四個分隔開的工作區(qū)域:

1、試劑貯存和準備區(qū)

2、標本制備區(qū)

3、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)

4、擴增產物分析區(qū)

如使用全自動分析儀,區(qū)域可適當合并。

(二)各工作區(qū)域須有明確的標記,避免不同工作區(qū)域內的設備、物品混用。

(三)進入各工作區(qū)域須嚴格按照單一方向進行,即試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產物分析區(qū)。

(四)不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開各工作區(qū)域時,不得將工作服帶出。

二、工作區(qū)域儀器設備配置標準

(一)試劑貯存和準備區(qū)

1、2~8℃和-15℃冰箱

2、混勻器

3、微量加樣器(覆蓋l~1000ul)

4、移動紫外燈(近工作臺面)

5、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)

6、專用工作服和工作鞋

7、專用辦公用品(二)標本制備區(qū)

1、2~8℃冰箱、-20℃或-80℃冰箱

2、高速臺式冷凍離心機

3、混勻器

4、水浴箱或加熱模塊

5、微量加樣器(覆蓋1~1000ul)

6、可移動紫外燈(近工作臺面)

7、超凈工作臺

8、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)

9、專用工作服和工作鞋

10、專用辦公用品 如需處理大分子DNA,應備有超聲波水浴儀。(三)擴增反應混合物配制和擴增區(qū)

1、 核酸擴增儀

2、 微量加樣器(覆蓋1~1000ul)

3、 可移動紫外燈(近工作臺面)

4、 消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心) 5、專用工作服和工作鞋

6、專用辦公用品

PCR實驗室建設四要素

1 試劑準備區(qū)

用于試驗試劑的準備。該區(qū)域為正壓,目的是防止污染物質溢入。該區(qū)域內部又可分為3個區(qū)域:普通提取試劑的準備區(qū)、PCR試劑準備區(qū)和PCR主反應液準備區(qū)。在普通提取試劑的準備區(qū)內準備一些樣品核酸提取時所需的裂解液、提取液等;PCR試劑準備區(qū)用于PCR試劑的制備和保存。例如準備引物、探針等PCR試劑。為了防止交叉污染,避免反復冷凍和解凍,試劑存貯溶液應該被平均為小的工作體積,儲存在這個房間以備后用:PCR主反應液準備區(qū)將進行主反應混合液(除了樣品。所有PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要提示:不能將其它房間的材料(包括擴增、模板和目標核酸或陽性對照、供應品、或設備)帶進試劑準備區(qū)。

2 樣品準備區(qū)

該區(qū)域無壓力設置要求。該區(qū)域是用于對樣品進行分樣,將樣品進行研磨、粉碎、勻漿的區(qū)域。由于在這些粉碎、研磨和勻漿處理過程中會產生氣溶膠,因此,存在陽性樣品污染后續(xù)操作的可能性。該區(qū)域與后面的區(qū)域應嚴格隔離,應放在與后面的三個區(qū)域隔開的獨立的房間中。在樣品準備區(qū)內還可設立一個專用的封閉區(qū)或房間用于樣品的接收和儲存。這個房間可以放置冰箱用于樣品儲存,應該和樣品準備區(qū)其它區(qū)域隔離開。樣品準備區(qū)域的人員不得進入試劑準備區(qū)。

3 核酸提取區(qū)

核酸提取區(qū)是進行樣品核酸提取的區(qū)域。該區(qū)域為負壓,目的是防止核酸溢出造成污染。樣品準備區(qū)又包括從樣品中進行核酸提取和純化的區(qū)域以及將核酸加到包含PCR主反應混合液管中的操作區(qū)域。添加完樣品后,PCR管的蓋子要盡可能快地蓋好。使用PCR板和膠蓋時,陽性對照和含目標序列的樣品要與待測樣本分開操作,以避免模板添加時造成交叉污染

重要提示:這個房間里的一切物品不得帶入試劑準備區(qū)。

4 擴增和產品檢測區(qū)

該區(qū)域是用來進行PCR擴增和PCR分析的。PER儀放置在這個區(qū)域。房間保持負壓,目的是防止核酸溢出。在該區(qū)域人員一定要一直穿戴工作服

和手套,在離開房間前脫去,防止擴增子污染其它地點。所有用于擴增和產品檢測的設備要指定用于這個房間。PCR分析]二作也設置在該區(qū)域,例如:酶切、測序、克隆等,但實驗室應盡可能把這些活動分隔在不同區(qū)域或不同房間。以降低擴增產物的污染風險。如果沒有條件在該區(qū)域設立負壓,此區(qū)域須建立排風裝置。

重要提示:這個房間的物品不能帶入樣品準備區(qū)或試劑準備區(qū)。

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